疎水性クロマトグラフィに伴う耐熱性ホスタファーゼ活性の変動

耐熱性ホスファターゼを含んだBacillus stearothermophilus 粗酵素試料を、リソースIsoによる疎水性クロマトグラフィにかけ分離を行った。1.5M→0M 硫酸アンモニウムの直線逆濃度勾配によって溶出を行ったところ、ホスファターゼは不活性な形で溶出され、これは硫酸アンモニウムによる濃度依存的阻害に起因することが判明した。ホスタファーゼの反応混合液に種々の濃度の硫酸アンモニウムを添加したところ、0.15Mの硫酸アンモニウム存在下で約80％の阻害が認められた。加えて、この阻害作用は単に硫酸アンモニウムの添加によってpHが酸性側に傾くことによるものではないことも明らかとなった。

Thermostable phosphatase partially purified from thermophilic bacteria, Bacillus stearothermophilus, was chromatographed on Resource Iso hydrophobic resin. When linear reverse gradient elution with 1.5 M → 0 M ( NH(4))(2)SO(4) was performed, phosphatase was found to be eluted as latent form, which revealed dose-dependent inhibitory effect of (NH(4))(2)SO(4) on phosphatase. When various concentrations of (NH(4))(2)SO(4) were added into phosphatase reaction mixture, about 80% inhibition was observed in the presence of 0.15 M (NH(4))(2)SO(4). Acidification by adding (NH(4))(2)SO(4) was not responsible for this inhibition, because addition of (NH(4))(2)SO(4) solution which pH was previously adjusted to 9.0 showed same inhibitory effect.