Co-purification of Plasma Membrane ATPase and Phosphatidylinositol Kinase from Pea Plasma Membranes

The plasma membrance ATPase was partially purified by a linear glycerol density gradient centrifugation of the detergent-solubilized plasma membrance poteins and subsequent separation by a size-exclusion column chromatogrphy. A purified ATPase preparation is shown to contain a 97.6kDa protein that was cross-reacted with an antibody raised against mung bean H+-ATPase. The preparation also exhibited the phosphorylation of exogenous phosphatidylionsitol(PI) when supplized with [γ-32P]ATP. These results indicate that one form plasma membrance ATPase is co-purified with PI kinase.

エンドウの上胚軸組織から分離した原形質膜画分におけるATPアーゼとホスファチジルイノシトールリン脂質リン酸化酵素との相互作用を解析する目的で、双方の原形質膜画分からの可溶化とそれらの部分精製を試みた。原形質膜のTritonX－100可溶化画分をグリセロール連続密度勾配遠心分画に供し、得られた活性画分をさらに分子ふるいカラムクロマトグラフィーによって分離した。この結果、ＡＴＰアーゼとホスファチジルイイノシトールリン脂質リン酸化酵素は共精製され、非変性条件下では双方の活性を分けることができなかった。