蛍光pH指示薬を用いたフローサイトメトリーによる細胞内pHの測定と温熱およびアミロライド誘導体の細胞内pHへの影響

エールリッヒ腹水癌細胞とそのアドリアマイシン耐性細胞において蛍光pH指示薬2'、7'-bis-(2-carboxyethyl) carboxyfluorescein] (BCECF) の蛍光量をフローサイトメトリーで測定することによって細胞内pHの検量曲線を作成することができた。このことより、これらの細胞においてBCECFの蛍光量で細胞内pHの変化を簡易に比較できることを示唆した。さらに、温熱、Na(+)/H(+) exchanger の阻害例であるアミロライド[3,5-diamino-6-chloro-N-(diaminomethylene) pyrazinecarboxamide]、およびアミロライド誘導隊MH-12-43[N-amidino-3-amino-6-chloro-5-(N-ethyliso-propylamino) pyrazinecarboxyamide] の細胞内pHへの影響をエールリッヒ腹水癌細胞で観察した。37℃では、0.5mMアミロライド、0.05mM　MH-12-43により細胞内pHは減少し、42℃処理によりさらに減少した。42℃において、0.05mM　MH-12-43による細胞内pHの減少は、0.5mMアミロライドによる減少より大きかった。

We examined relationship between intensity of intracellular fluorescence of [2', 7'-bis-(2'-carboxyethyl) carboxyfluorescein] (BCECF) and intracellular pH in Ehrlich ascites tumor cells and their adriamycin-resistant strain, and found a good correlation between them at both strains. This suggests that changes in the intracellular pH on these strains may be obtained through measurement of intracellular fluorescence of BCECF by flow cytometry. Further, we examined influence of hyperthermia, 3, 5-diamino-6-chloro-N-(diaminomethylene)pyrazinecarboxamide (amiloride), an inhibitor of Na(+)/H(+) exchanger, and its derivative; N-amidino-3-amino-6-chloro-5-(N-ethylisopropylamino) pyrazinecarboxyamide (MH-12-43) on the intracellular pH in Ehrlich ascites tumor cells. The treatment of 0.5mM amiloride or 0.05mM MH-12-43 reduced intracellular pH at 37℃, while the more reduction was observed by the treatment at 42℃. The reduction of intracellular pH by 0.05mM MH-12-43 was more substantial than that of 0.5mM amiloride at 42℃.