Possible Involvement of AAAG Motif and PsDof1 in　Elicitor-Induced Gene Expression in Pea

Recently, we, isolated cDNA clone, PsDof1, from clicitor-treated pea cDNA library. The putative gene product, a PsDof1, encodes DNA binding protein that specifically binds the DNA fragment containing AAAG core sequence. In this paper we report that GST-PsDof1 fusion protein specifically binds to the promoter region containing AAAG core sequence(s) of PsCHS1, one of the elicitor-inducible genes encoding chalcone synthase (CHS). Furthermore the addition of DNA fragment containing AAAG motif to the 35S minimal promoter provided the elicitor-responsibility in transient transfection assay using pea protoplasts. These results suggest that PsDof1 might be involved in defense responses by acitivating the transcription by a binding to AAAG core sequence in the promoter of the defense-related genes in pea.

エリシターを処理したエンドウ上胚軸由来のRNAから作成されたcDNAライブラリーからエリシター処理により発現が増高する遺伝子候補のcDNAとしてPsDof1が単離された．大腸菌で生産されたGST-PsDof１融合タンパク質はAAAG配列をコアとするDNAに結合することが明らかにされている．本論文ではGST-PsDof１がエリシター応答性遺伝子の一つ，PsCHS1のプロモーター上のAAAGまたはCTTT配列を有する断片に特異的に結合することを明らかにした．更にAAAG配列のエリシター応答性シスエレメントとしての機能を解析するため，AAAG配列を４回繰り返したユニットをCaMV35Ｓの最小プロモーターとCATレポーター遺伝子に連結したキメラ遺伝子を構築し，エンドウプロトプラストにエレクトロポレーション法により導入した．CAT活性を指にプロモーター活性を調べたところ，AAAG配列を有するプロモーターは，エリシター処理により活性化されることが明らかとなった．これらの結果はPsDof１がエリシター応答性防御遺伝子のプロモーター上のAAAG配列に結合し，転写を活性化させる可能性を示唆している．