ラット再生肝組織におけるProliferating Cell Nuclear AntigenとBromodeoxyuridineの染色性についての比較研究 ―固定条件の影響について―

種々の条件下（10％緩衝ホルマリン・6時間、1％パラホルムアルデヒド・6時間、100％メタノール・4時間、70％エタノール・6時間、100％アセトン・2時間、カルノア液・4時間）で固定したラット再生肝組織に免疫組織染色を施し、Proliferating cell nuclear antigen （PCNA）の核内染色パターンについての検討を行った。その結果、100％メタノール及び70％エタノールで固定した場合には、明瞭な顆粒状の染色像が得られた。10％緩衝ホルマリン及び1％パラホルムアルデヒドの場合には、明瞭な顆粒状並びに弱いびまん性の染色像が得られた。S期に対する代表的なマーカーとして知られるBromodeoxyuridine （BrdU）の染色像との比較のもと、再生肝組織中のPCNA陽性細胞の数とBrdU陽性細胞の数を再生ピーク時の術後1日目で検討したところ、100％メタノール及び70％エタノールで固定した際の陽性細胞数が、最もBrdUの所見と一致した。しかし、10％緩衝ホルマリン、1％パラホルムアルデヒド、100％アセトン、カルノア液で固定した場合には、BrdUの所見と著しい解離が見られた。これらの知見は、PCNAを指標に細胞増殖を評価する上で、100％メタノール、70％エタノールでの固定が有用であることを示唆する。

Immunohistochemical staining pattern of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was examined in rat regenarating liver specimens fixed under the various conditions (10% buffered formalin for 6 hr, 1% paraformaldehyde for 6 hr, 100% methanol for 4 hr, 70% ethanol for 6 hr, 100% acetone for 2 hr and Carnoy solution for 4 hr). Most distinct granular staining pattern of PCNA was observed in fixation with 100% methanol or 70% ethanol. Specimens fixed with 10% buffered formalin or 1% paraformaldehyde showed both distinct granular and slight diffuse pattern of PCNA staining. Specimens fixed with 100% acetone showed only slight diffuse staining. Specimens fixed with Carnoy solution showed little staining. Number of PCNA positive cells in the specimens fixed with 100% methanol or 70% ethanol on 24 hours after hepatectomy coincided closely with those of BrdU positive cells, which is known to be a representative marker of cell proliferation. In contrast, dissociative result was obtained in specimens fixed with 10% buffered formalin, 1% paraformaldehyde, 100% acetone or Carnoy solution when numbers of PCNA positive cells were compared with those of BrdU. These findings suggest that tissue specimens fixed with 100% methanol or 70% ethanol is useful for evaluating the extent of cell proliferation.